描述
 随着测序技术尤其是高通量测序技术的迅速发展,人们对基因组变异/基因表达差异与表型之间关系的认识越来越深刻。然而传统的Bulk RNA测序手段是针对细胞集合进行测序,而单个细胞特异性的信息往往被掩盖,导致错失很多重要信息。
10X Genomics平台首先利用微流控技术分选单个细胞,然后将带有barcode和引物的凝胶珠以及单个细胞包裹在油滴中;在油滴中凝胶珠溶解释放反转录oligo,细胞裂解释放mRNA,通过mRNA 末端标签扩增(3’WTA)法获得用于测序的带barcode的cDNA;液体油层破坏后,cDNA进行后续文库构建,使用Illumina测序平台检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据,10min内自动完成多至80,000个细胞的捕获,细胞捕获率最高65%。可实现大量大细胞的快速高效标记、测序和分析,获得单细胞水平的基因表达谱和差异情况,并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱。
技术优势
超高的细胞通量,利用10X Genomics平台实现真正的单细胞测序。细胞捕获效率高,可实现大量大细胞的快速高效标记、测序和分析。项目周期短,技术应用范围广。
技术路线
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研究内容
众所周知,单细胞测序已然是发表高分文章的利器,几乎每天都有不止一篇单细胞文章发表。目前,单细胞技术已经广泛应用于肿瘤,免疫,发育生物学,神经科学,细胞治疗,药物研发及动植物研究中。
信息分析内容
1.测序数据质控和定量
a)测序序列统计与质控
b)数据定量
c)多样本数据合并和定量均—化
d)最终鉴定细胞表达量矩阵
2.细胞亚群分类
a)细胞过滤
b)单细胞亚群分类
3. Marker基因分析
4. 差异基因富集分析
a)差异基因GO富集性分析
b)差异基因KEGG富集性分析
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